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色谱双峰产生的可能及判断和处理

发布时间:2019-09-26   点击次数:120次

HPLC分析中,在se谱柱正常,样品灵敏度足够,分析方法合适,se谱峰在出峰时间较短的条件下(不包括梯度),峰型应对称而尖锐。但是,在对样品了解程度不够,方法不妥,样品处理方法及进样方式不合理下,会出现各种意想不到的问题,而对se谱峰难以作出合理的解释,尤其对于新手更是如此。下面根据本人几年工作的体会,提出一些看法,向同仁指教。    se谱双峰指的是明是一种物质,但在se谱图中出现双峰,而表明含二种物质。我将这种情况分为四种原因。    

1 se谱柱     如果你分析样品时发现每个se谱峰都双峰出现(出峰越快,双峰的可能性会减少),尤其采用单一纯物质时,可以肯定se谱柱出问题-柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少,原来se谱柱正常,色谱峰的形状多为一da峰带一小峰,不一定拖尾,这一般应是柱头受堵,将色谱柱反过来接,用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂,将堵在柱头的残留物冲掉,再反过来,一般情况下就行了。当然不反冲,正冲有时也会正常的。如果峰拖尾,双峰强弱相差不da,柱头固定相变脏或流失可能性更da,这是可以将进样那头拧开,将微孔滤片超声,柱头刮去一部分填料,重新填上新填料拧紧,不过这种活,需要一定技术,同时不能老干那种事,否则用不了几次,色谱柱就会应柱效很低而报废。    

2 溶剂极性及进样量     许多HPLC分析者对此可能不以为然,一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容,而这确是双峰产生的一个很重要的原因。目前HPLC分析多为反相se谱,流动相多为甲醇、乙腈、水,加各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。溶解方法是用流动相溶解,但是很多情况是不一致的。当用溶剂极性强度da的试剂,如纯甲醇、纯乙腈,纯乙醇,而分析体系中以水为主,样品进样量da,如定量管为20ul,此条件下完全可以肯定,单一的纯物质出双峰,第二峰比第—峰小(每次都不太一样),且拖尾,保留时间会提前(相对进样量少而言),将进样量减少一半以上,峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太da,而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。上面提到进样量造成双峰的一个原因,另一个原因是,进样量不一定大,但量很大,se谱图上的双峰紧靠在一起,基本上齐高,不拖尾(如果出峰很快,也可能是se谱柱问题)。将样品稀释再进样就可以了,这是由于进样量过大,se谱柱过载造成的。    

3 样品的特性     有些样品由于其化学结构的特点,存在互变异构现象,而这种互变异构体无法分开,而是以一个动态平衡存在。在se谱分析时,在一个特定的条件下,一种物质将出现双峰,双峰靠的很近,基本齐高,不拖尾,条件稍一变化,尤其pH,双峰现象将消失,如红霉素等。有的样品紫外的se谱图上看不到双峰,但在LC-MS下,用质谱检测器,其质谱的总离子流图上较明显,例如我分析过的农药啶虫眯(吡虫清)。    

4 参数 记录的参数一般都内定的,不必修改,但GC和HPLC的参数是不完全一致的,例如C-R3A数据记录仪上的一般记录时间间隔GC为2ms,HPLC     为5ms,如果记录间隔时间缩短,一个峰将变为二个峰或更多。

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